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Sena Kobayakawa, le héros de l'histoire, est un jeune homme frêle et craintif. À force de jouer les larbins pour les autres, il a acquis une vitesse de course phénoménale. Dès son arrivée au lycée, il est remarqué par Yōichi Hiruma, le démoniaque quarterback de l'équipe de football américain de son lycée, les Deimon Devil Bats. Si au début Sena accepte d'en faire partie en tant que simple manager, il va rapidement devenir Eyeshield 21, le mystérieux running back de l'équipe. Incognito derrière sa visière teintée, il constitue par sa rapidité l'arme secrète des Deimon Devil Bats. L'histoire se focalise tout autant sur l'évolution de l'équipe, sur l'élargissement de son effectif, et sur le rêve irréaliste des vétérans du club, Hiruma et Kurita, de participer au Christmas Bowl.

Tags associés : Eyeshield

Sena Kobayakawa est le chétif personnage principal du manga, responsable et surtout running back des Deimon Devil Bats. Il n'a aucun ami, excepté Mamori qui veille sur lui depuis l'enfance, et une confiance en lui proche de zéro. Ainsi, depuis la maternelle, les autres profitent de sa timidité et de sa fragilité pour s'en servir comme larbin. Mais à force de courir partout pour eux, il finit par développer une vitesse remarquable. Lorsqu'il entre en première année au lycée Deimon, il cherche un club pour se faire des amis. Par un concours de circonstances, il vient à parler avec le gentil Kurita de l'équipe de football américain. Constatant le faible nombre de joueurs (ils ne sont que 2 avec Hiruma) mais effrayé par la brutalité de ce sport, il se propose comme responsable. Hiruma, qui l'a déjà vu courir, sent qu'il tient un joueur de choix pour son équipe et le fait rapidement jouer sur le terrain. C'est ainsi que Sena devient le running back de l'équipe, bien caché derrière sa visière teintée pour que son identité reste confidentielle. Au fur et à mesure des épreuves traversées, il développe des techniques personnelles telles que le Devil Bat Ghost, ou le Devil Bat Hurricane.

Tags associés : Sena, kobayakawa

Mamori Anezaki est l'amie d'enfance de Sena, qui le défend depuis des années contre ceux qui lui veulent du mal. Encore aujourd'hui, elle s'occupe de lui telle une mère-poule un peu envahissante. Au début de l'histoire, Mamori vient de rentrer en deuxième année au lycée Deimon et appartient au comité de discipline. Connaissant Hiruma, elle craint pour Sena lorsque celui-ci rejoint les Deimon Devil Bats et l'enjoint même à quitter le club. Comme Sena refuse, elle devient manager de l'équipe pour pouvoir continuer à veiller sur lui. Comme Loïs Lane dans Superman, elle ne reconnaît plus Sena lorsqu'il est Eyeshield 21.

Tags associés : Mamori, anezaki

Yōichi Hiruma, le quaterback de l'équipe, est en deuxième année au lycée Deimon, et constitue le principal élément délirant de l'histoire. Dans la vie de tous les jours, son intelligence lui permet d'inventer toutes sortes de combines et de manipulations pour parvenir à ses fins. Il collectionne par exemple des informations compromettantes sur tout le monde, afin de pouvoir exiger ce qu'il veut à n'importe qui en cas de besoin, informations qu'il conserve dans son fameux "carnet de menace" qu'il n'hésite jamais à utiliser. Toujours prompt à sortir la mitraillette ou le bazooka, c'est un démon craint de tous. Sur le terrain, même s'il est aussi effrayant pour ses coéquipiers, c'est aussi un fin tacticien qui comble les lacunes de ses joueurs (dont la plupart sont des élèves forcés à jouer par le chantage, ne faisant même pas partie du club) par des stratégies diverses et parfois peu scrupuleuses. En plus de son intelligence, Hiruma est un quater back aux passes expertes.

Tags associés : Yoichi, hiruma